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  • HE制片的質量控制

    2016-9-6 8:11:25 | 信息來源:病理室 陳程 | 查看:

     

    常規HE制片技術是病理制片的基礎技術,也是病理醫師作出病理診斷的重要依據。從事病理制片的病理技師,不僅要懂得病理制片技術的相關原理,還應熟練掌握HE制片技術的操作,這其中包括切片質量與染色效果。因此必須努力提高HE制片的質量,以保證病理醫師作出正確合理的病理診斷。
    一、優質HE切片的質控要求
    病理技師將來自臨床患者、尸體解剖的組織標本通過取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、攤片、貼片、烤片、染色和封片等一系列操作過程,制成一張玻片標本;在顯微鏡下觀察時,達到核質清楚、紅藍分明、對比恰當、結構清晰,是我們病理技師應當追求的目標,這要求我們做到如下幾點:
    1.切片:完整、厚薄均勻、組織無刀痕   
    切片完整是指把包埋的組織最大面積完整切出,這要求包埋時要盡量將組織最大面積埋平整,碎小組織也應均勻平埋。切片要求組織上無刀痕,有刀痕的切片影響美觀,若刀痕在病灶處更會不利于診斷醫師的診斷。
    2.貼片:位置恰當、無皺褶   
    貼片時應“定點”貼片,即把每張蠟片貼在載玻片標簽處以外的玻片中間,這樣既整齊美觀,在鏡下觀察時又可在顯微鏡載物臺較小范圍內移動,方便操作,同時染色時也不會出現因貼片位置過高而試劑浸泡不到使染色不勻的情況。
    3.染色:鮮艷、對比清晰   
    組織和細胞經蘇木精-伊紅(HE)染色后,細胞核被染成藍色,細胞漿、纖維、肌肉和紅細胞等呈深淺不一的紅色。染色要鮮艷,透明度好,紅藍分明,對比清晰,無偏藍或偏紅現象,才利于鏡下觀察,這要求病理技師隨時注意染色劑的染色情況,調整染色時間,更換染色試劑。
    4.封片:無氣泡、封膠不外溢   
    封片時所滴的樹膠要適量,濃度要適中,以封膠后樹膠充滿又不外溢為宜,樹膠濃度較高時可適量加入二甲苯加以稀釋。
        此外,還應玻片整潔、標簽端正、號碼清楚。
       二、常見HE切片染色缺陷的成因和對策
    1.切片污染   
    包括染液的污染和組織的污染。染液的污染,是由于蘇木精或伊紅染料的絮狀沉淀物所致,污染物遮蓋該部位的細胞或組織而難以觀察其形態改變,這種污染可通過定期過濾各種染液和試劑避免。組織污染是指由于切片和貼片過程中,被其他病例的組織和細胞污染,如果是不同類型的組織,容易在顯微鏡下發現,如果是被相同類型而不同病變的組織污染,則不容易在鏡下發現,可能導致誤診。因此,在攤片時要非常小心,恒溫貼片機里的水要注意更換或貼片后用紙在水面將殘余蠟塊拖走,以保證不污染。還有,取材時也可造成組織污染,在甲例取材后,如不及時把砧板和刀剪沖洗干凈,若留下殘余組織,在乙例取材時把甲例的殘余組織誤作乙例取材,同時放進脫水盒內,這樣切片時,包括甲乙兩例組織,造成組織污染。
    2.染色不均勻   
    即部分組織和細胞染色尚可,部分模糊不清,這種切片無法診斷。其原因是由于染色時二甲苯脫蠟不徹底,切片部分著色不好。常見于冬季室溫低時,二甲苯的脫蠟力度降低,或使用已多次脫蠟的二甲苯所致。克服辦法是在冬季室溫低(14℃以下)時,應把二甲苯盛缸在水浴中適當加溫至30℃脫蠟,或更換新的二甲苯。在脫蠟時把玻片架反復提起放下,可加速脫蠟。
    3.組織“發白”   
    鏡下見細胞模糊不清,核不著色,呈灰白色。常見于淋巴結和鼻咽等組織。這是由于組織固定不當所致,當組織固定不及時、固定液不足或濃度過淡,或組織的致密度高、天氣寒冷有關。淋巴結有一個致密的包膜,影響甲醛液的浸透;因此,固定前先把淋巴結對半切開,再行固定,可獲得滿意效果。
    4.切片內有大小不一的氣泡   
    切片內氣泡的出現,既影響美觀,也妨礙閱片。氣泡的產生,多因封片的樹膠過濃或封片前吸管攪動樹膠產生氣泡所致。糾正方法是封片用的樹膠濃度要適中,以提起吸管時膠如珠滴狀慢慢滴下為宜,樹膠過濃時,可適當加入二甲苯加以稀釋;封片時不要隨意攪動樹膠,在樹膠瓶外將吸管內空氣排出,再伸入瓶內吸取樹膠。氣泡的出現也與封片時的技巧有關,滴樹膠后,若蓋玻片平放,則易產生氣泡;若把蓋玻片傾斜成一定的角度放下,即蓋玻片一側先接觸樹膠后再慢慢把蓋玻片放下,則可避免氣泡的出現。
    5.切片時不成片,整片易破碎   
    多因組織含血過多,含血過多的組織很脆,包埋后切片時易破碎不成片,常見于子宮刮出的血塊和輸卵管妊娠組織等。遇此情況,可向蠟塊呵一口氣后切片即會有所改善。
    6.切片時裂開不成片   
    切片時裂開,一方面是由于組織內有鈣化灶或組織內有其他堅硬物體如小鋼釘,在切片時就會出現大的刀痕,甚至使蠟片裂開分離;另一方面是由于在包埋時組織與石蠟融合不好,其間部分石蠟松浮,在切片時就使蠟片分離開裂。如有堅硬物體如小鋼釘應將其取出,重埋再切;造成融合不好的原因是包埋石蠟的溫度較低,包埋時動作不夠快,應注意包埋石蠟的溫度要比組織浸蠟的溫度高數攝氏度(4-6℃),同時在包埋時操作要快,不要把組織翻來翻去。
    7.組織上有篩狀小空洞   
    組織內出現篩狀小空洞,常見于較軟的組織如腦、子宮內膜和鼻咽粘膜等。原因是切片時過度冷凍蠟塊使其過硬,則開始切出的前幾張蠟片常出現篩狀空洞。克服方法是在修平蠟塊后,應多切數片使組織蠟塊稍回暖后才開始選取蠟片。
    8.切片太厚或厚薄不均   
    切片太厚主要是刀片太鈍或切片機內機械的磨損,造成軸承的松動,因此,需及時更換新的刀片,擰緊切片機的蠟塊夾頭和刀座上的螺旋,并注意切片機的修理和保養。其次是切片時余隙角太小,當刀鋒第一次切片經過組織時為虛切,或切出很薄而不完整的切片;第二次切片經過組織面時因微米數增多而加厚,且因蠟塊表面受壓力而膨脹,因而切出較厚切片。出現此情況,就要調試刀座內的刻度盤,當余隙角為2°~4°時,就不會出現過厚或過薄的情況。
        當然,在實際工作過程中遇到的問題不止這些,我們應該注意發現問題、找到原因、解決問題,依照經驗、結合實際,盡量減少乃至避免這些問題的存在,保證HE制片的質量,提供更優質的HE制片。
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